新城疫抗體檢測試劑盒

使用說明書

產品名稱

通用名：新城疫抗體檢測試劑盒

包裝規格

96T×1/盒

檢測原理

    本試劑盒由預包被新城疫病毒重組蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測雞血清、血漿樣本中新城疫病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有新城疫病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶標結合物反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有新城疫病毒抗體。

試劑盒組成

儲存及有效期

2～8℃保存，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

適用儀器

含450nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

樣品準備

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.根據樣本數量準備對應數量的小刻度EP管或血清稀釋盤，用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋（如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中，混勻）陰性、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水加1份濃縮洗滌液)。

檢驗方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性、陽性對照各1孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃溫箱孵育30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加250ul工作洗滌液，用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去，重復洗滌5次，每次洗滌后需拍干液體。

6.每孔加酶標記物100μl，置37℃避光反應30分鐘。

7.甩去孔內液體，每孔加250ul工作洗滌液，用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去，重復洗滌5次，每次洗滌后需拍干液體。

8.根據樣本數量將顯色液A與顯色液B按等體積比例混勻配置為底物工作液，現配現用。每孔加100ul，置37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液100μl，混勻，于450nm 測定各孔吸光值（OD值），

參考值

實驗正常的情況下，陽性對照OD-陰性對照OD＞0.2。

檢驗結果的解釋

1. S/P＝(樣本OD-陰性對照OD)/(陽性對照OD-陰性對照OD)。

2. S/P≥0.4時結果判讀為陽性。

3. 0.2＜S/P＜0.4時結果為疑似陽性；若接種過對應疫苗，則提示抗體水平不足，建議補打疫苗。

4. S/P＜0.2時結果判讀為陰性。

試驗方法的局限性

1. 本試劑盒僅作為定性檢測雞血清或血漿中新城疫病毒抗體的粗略評估。

2. 本試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗。

注意事項

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

8.不同批號試劑組分不得混用。