小反芻病毒酶聯抗體檢測試劑盒使用說明書（阻斷法）

檢測原理

    本試劑盒由預包被小反芻病毒重組抗原的酶標板、酶標單抗及其他配套試劑組成，應用阻斷法原理檢測血清或血漿樣本中小反芻病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，再加入酶標單抗工作液，經溫育后若樣品中含有小反芻病毒抗體，則阻斷酶標單抗工作液中的單克隆抗體與酶標板中包被的抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標單抗，溫育后經洗滌除去未結合的酶標單抗，在孔中加TMB底物液，與酶標結合物反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有小反芻病毒抗體。

試劑盒組成

儲存及有效期

2～8℃保存，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。

適用儀器

含450nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

樣品準備

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水加1份濃縮洗滌液)。

檢驗方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.根據待檢樣本數量取所需板條，每孔中加入樣本稀釋液50ul，再加入待檢血清50ul。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照100μl；

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃溫箱孵育30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加滿工作洗滌液，用震蕩的方式洗滌酶標板60秒后棄去工作洗滌液，重復洗滌5次，*后一次拍干板孔中液體。

6.每孔加酶抗體工作液100μl。

7.置37℃避光反應30分鐘。

8.甩去孔內液體，每孔加滿工作洗滌液，用震蕩的方式洗滌酶標板60秒后棄去工作洗滌液，重復洗滌5次，*后一次拍干板孔中液體。

9.根據樣本數量將顯色液A與顯色液B按等體積比例混勻配置為底物工作液，現配現用。每孔加100ul，置37℃避光反應10分鐘。

10.每孔加終止液100μl，混勻，于450nm測定各孔吸光值（OD值）。

參考值

實驗正常的情況下，陰性對照OD＞0.5，同時陽性對照OD＜0.5×陰性對照OD

檢驗結果的解釋

1. 根據實驗得到的陰性對照OD值，計算出陽性臨界OD值和陰性臨界OD值。

2. 陽性臨界OD=0.5×陰性對照OD；陰性臨界OD=0.6×陰性對照OD。

3. 樣本OD＜陽性臨界OD時，結果判讀為陽性。

4. 陽性臨界OD≤樣本OD≤陰性臨界OD時，樣本可能存在抗體效價不足或疑似感染。

5. 樣本OD＞陰性臨界OD時，結果判讀為陰性。

試驗方法的局限性

1. 本試劑盒僅作為定性檢測血清或血漿中小反芻病毒抗體的粗略評估。

2. 本試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗。

注意事項

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

8.不同批號試劑組分不得混用。